jueves, 30 de octubre de 2014

Pruebas Bioquímicas

Por Quistián García Hylary
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias de objeto de identificación. Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48 horas.
PRUEBAS CON LECTURA INMEDIATA
·         Catalasa
La catalasa es una enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan la catalasa hidrolizan el Hidrogeno en agua y el oxígeno gaseoso que se libera produce burbujas.
·         Oxidasa
Sirve para determinar la presencia se enzimas oxidantes. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citromooxidasa que activa la oxidación  del citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrogeno según la especie Moraxella Helicobacter y Brucella.
·         Indol
Mediante esta prueba se detecta la liberación de Indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante la enzima triptófanosa.
PRUEBAS LENTAS CON LECTURA DE 18 A 48 HRS
·         Óxido-fermentación
Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de Carbono pro parte de un microorganismo se realiza vía oxidativa o por vía fermentativa.
·         Reducción de nitratos
Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir nitratos en nitritos. Se utiliza para asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae.
·         Rojo de metilo
Es un indicador de pH. Actúa entre un pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo hasta amarillo respectivamente. Mediante esta prueba se comprueba la capacidad de un microorganismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación ácido-mixta. Se utiliza como parte de la identificación a nivel especie de los bacilos entéricos Gram negativos.
·         Voges-Proskauer
Permite observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Se usa en la identificación de bacilos entéricos Gram negativos.
·         Agar de Hierro Kligler
Mediante esta prueba se puede determinar la capacidad de un microorganismo de metabolizar un hidrato de carbono específico incorporado en un  medio de crecimiento básico; la producción o no de gases CO2 e H2 como productos finales del metabolismo de los hidratos de carbono. Y la producción de ácido sulfhídrico.
Por Ramírez Hernández Jessica
Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Las principales pruebas son:
IMVIC
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes. La presencia de estos indica contaminacion fecal.
Indol
La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo
Estudia la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer
Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.
Técnica: Sembrar la muestra en el medio e incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el volumen del medio añadir a partes iguales el volumen de los reactivos, agitar para exponer el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojo-rojizo en menos de 1h. VP NEGATIVO: Amarillo en superficie.
Citrato
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa
La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la cadena respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido de hidrógeno.
Coagulasa
Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo.
Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma. Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.
Reducción Nitratos
Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D - Galactosidasa
Estudia la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas
Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos presentes en el medio.
Hidrolisis Gelatina
Estudia la capacidad proteolítica (la capacidad de egradación de proteínas) del microorganismo por degradación de la gelatina.
Óxido - Fermentativa o de Hugh-Leifson
Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por via oxidativa o por via fermentativa.
Ácidos y gases
Estudia la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la producción de ácidos y la formación de gas.
Agar TSI
El agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción de gas y ácido sulfhidrico (como producto metabolico final de los aminoacidos azufrados).
Índice Analítico de Perfil
API 20NE Sistema de detección a las 24 horas de incubación.
El Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile Index o API) son un conjunto de pruebas bioquímicas que se concentran en muy poco espacio mediante el uso de pocillos con el reactivo correspondiente ya preparado para ser usado.
Se llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la muestra problema. Se sellan los pocillos que sean obligatorios. Se incuba la estufa a unos 37 °C normalmente. Posteriormente se comprueba los resultados pasado el tiempo indicado en la tira.
Los resultados se apuntan por cada prueba bioquímica en el casillero correspondiente, de manera que al final dará un número de varias cifras. Con este número se puede buscar en el libro de referencia de las tiras API, el tipo de bacteria que se tiene en la muestra.
Son muy útiles, capaces de identificar en poco tiempo la bacteria problema (actualmente unas 600 especies). Hay varios modelos dependiendo del uso. Por ejemplo, si la muestra es un coprocultivo se debería usar una tira de enterobacterias.
Por Ramos Franco Michelle
Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Las principales pruebas son:
Indol
La prueba del Indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo
Estudia la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer
Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.
Técnica: Sembrar la muestra en el medio e incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el volumen del medio añadir a partes iguales el volumen de los reactivos, agitar para exponer el medio al O2. VP POSITIVO: Color rojo-rojizo en menos de 1h. VP NEGATIVO: Amarillo en superficie.
Citrato
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa
La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la cadena respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido de hidrógeno.
Coagulasa
Coágulos formados por la reacción de la coagulosa en un tubo de ensayo.
Estudia la producción del enzima coagulosa, capaz de coagular el plasma. Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureas
Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.
Reducción Nitratos
Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D - Galactosidasa
Estudia la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas
Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos presentes en el medio.
Por Rascón Castrejón Lizeth
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son suficientemente distintivas o diferenciales.
En el laboratorio disponemos de numerosas técnicas para la caracterización bioquímica de una especie. Además de los productos finales de los procesos metabólicos, también se necesita conocer con detalle cómo se producen estos cambios, como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas intervienen, cuales son los productos intermediarios además de que se deben reconstruir las secuencias de las reacciones bioquímicas que tienen lugar dentro de la célula. En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido.
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes. La presencia de estos indica contaminación fecal.
Indol: La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo: Estudia la fermentación ácido mixto con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer: Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.
Citrato: Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa: La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la cadena respiratoria del organismo.
Catalasa: Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido de hidrógeno.
Coagulasa: Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma. Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa: Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.
Reducción Nitratos: Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D – Galactosidasa: Estudia la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para metabolizar la lactosa.
Descarboxilasas: Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos presentes en el medio.
Hidrolisis Gelatina: Estudia la capacidad proteolítica (la capacidad de degradación de proteínas) del microorganismo por degradación de la gelatina.
Óxido - Fermentativa o de Hugh-Leifson: Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por vía oxidativa o por vía fermentativa.
Ácidos y gases: Estudia la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la producción de ácidos y la formación de gas.
Agar TSI: El agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción de gas y ácido sulfhídrico (como producto metabólico final de los aminoácidos azufrados).
Por Reyes Marcial Luis Diego
Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis que sirven para determinar la actividad metabólica de una cepa pura de microorganismos. Son empleadas principalmente para la identificación y clasificación de bacterias y hongos.
IMVIC
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes.
*      Indol: La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.
*      Rojo de metilo: Estudia la fermentación ácido mixto con producción de ácidos estables en el tiempo.
*      Voges-Proskauer: Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.
*      Citrato: Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Enzimáticas.
*      Oxidasa: La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la cadena respiratoria del organismo.
*      Catalasa: Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido de hidrógeno.
*      Coagulasa: Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma. Diferencia Staphylococcus aureus de otras especies.
*      Ureasa: Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.
*      Reducción de nitratos: Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa.
*      B-D-Galactosidasa: Estudia la capacidad de producir B-D-Galactosidasa, enzima necesario para metabolizar la lactosa.

*      Descarboxilasa: Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos presentes en el medio.

3 comentarios:

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  2. Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias que son objeto de identificación.
    Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que reaccionan con una enzima pre-formada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una
    incubación previa de 18 a 48hrs; a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan
    la sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de
    identificación que contienen el sustrato a metabolizar. A pesar de esto, algunas de estas pruebas pueden realizarse de forma rápida tras una incubación de unas 2-6hrs.

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